Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y prueba de ETS

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y prueba de ETS

¿Qué es el análisis de PCR? Analysis El análisis de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio diseñada para identificar pequeñas cantidades de ADN en una muestra mediante un proceso conocido como

Amplificación . Durante la amplificación por PCR, el ADN de interés se copia repetidamente hasta que haya suficiente para su análisis y detección. Por ejemplo, la PCR se puede usar para identificar pequeñas cantidades de ADN de los organismos que causan la gonorrea o la clamidia que están presentes en una muestra de orina.¿Cómo funciona PCR?

El primer paso en la PCR es calentar la muestra para que el ADN bicatenario se separe en dos cadenas simples: esto se denomina desnaturalización. Luego

Cebadores , muestras cortas de ADN que coinciden hasta los extremos de la secuencia de ADN de interés, se combinan con el ADN de muestra. Después de esto, se usa una ADNpolimerasa to para comenzar la replicación del ADN en la ubicación del cebador. Finalmente, el ADN se calienta para separar los filamentos una vez más, y todo el proceso de PCR comienza de nuevo. La cantidad del segmento de ADN de interés presente en la muestra aumenta exponencialmente con cada ciclo de PCR: una copia se convierte en dos, luego se convierte en cuatro, luego se convierte en ocho, etc .; de modo que, en general, solo se necesitan de 20 a 40 ciclos para determinar si el ADN en cuestión está presente (y, si es así, para proporcionar una muestra suficiente para el análisis).Todos los pasos de una reacción en cadena de la polimerasa (desnaturalización del ADN, aplicación de los cebadores y alargamiento del ADN) ocurren a diferentes temperaturas, por lo que una vez que la mezcla inicial se ha unido, los pasos se pueden controlar a través de un proceso conocido como termociclado , en el que la temperatura se mantiene en los niveles necesarios durante el tiempo suficiente para que ocurra cada paso.

Por lo tanto, la PCR es una forma eficiente de amplificar la cantidad de ADN objetivo en un solo tubo de ensayo con poca necesidad de intervención humana.

La reacción en cadena de la polimerasa representó una revolución en la técnica biológica cuando se desarrolló por primera vez a principios de la década de 1980, y el creador de PCR, Kary Mullis, ganó el Premio Nobel de Química por su trabajo en 1993. ¿Por qué la PCR es relevante para las pruebas de ETS?La reacción en cadena de la polimerasa y las técnicas relacionadas, como la chain reacción de la cadena de la ligasa

, están demostrando ser de importancia creciente para las pruebas de ETS. Esto se debe a que estas técnicas pueden identificar directamente pequeñas cantidades de ADN o ARN viral en las muestras. Identificar el código genético de un patógeno no requiere que el patógeno esté vivo, como el cultivo bacteriano o el cultivo viral. Tampoco requiere que la infección haya ocurrido hace bastante tiempo para que las personas hayan desarrollado una reacción detectable de anticuerpos (como la detectada por ELISA). Esto significa que las técnicas de PCR a veces pueden detectar enfermedades antes que otras pruebas, y sin tanto como para preocuparse por mantener las muestras vivas o probarlas exactamente en el momento correcto.

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